Лекарственные препараты пыльцевых аллергенов: современные аспекты стандартизации

Актуальность. Лекарственные препараты пыльцевых аллергенов являются наиболее востребованными. Терапевтическая польза от их применения зависит от стандартизации. Для повышения эффективности диагностики и лечения аллергических заболеваний необходимы современные методы оценки специфической (аллергенной) активности лекарственных препаратов пыльцевых аллергенов с применением стандартных образцов и методов физико-химического анализа.

Цель. Разработка методологических подходов к стандартизации лекарственных препаратов пыльцевых аллергенов для перехода к нормированию специфической активности в единицах аллергенной активности (ЕАА) и приведения качества препаратов в соответствие с требованиями Государственной фармакопеи Российской Федерации.

Материалы и методы. Использовали стандартные  образцы  пыльцевых  аллергенов  (АО «НПО «Микроген»), стандарт ВОЗ аллергена из пыльцы тимофеевки посевной, набор стандартов для эксклюзионной хроматографии MW 1350–670000 Da, бычий сывороточный альбумин, специфические IgE-содержащие сыворотки крови от лиц, сенсибилизированных к исследуемому аллергену, меченые антитела к IgE человека, стандартные образцы летучих растворителей для газовой хроматографии. Подтверждение подлинности стандартного образца предприятия аллергенной активности аллергена (СОП ААА) проводили методом вестерн-блота (аллергенные компоненты), содержание общего белка определяли колориметрически (метод Бредфорда). Дополнительно для изучения белковых фракций применяли метод высокоэффективной жидкостной хроматографии. Количество остаточных органических растворителей в препаратах аллергенов оценивали при помощи газожидкостной хроматографии.

Результаты. Вместо существующей ранее неспецифической характеристики аллергенной активности в единицах белкового азота (Protein Nitrogen Unit, PNU) был разработан  и апробирован новый метод контроля специфической активности в ЕАА на основе конкурентного иммуноферментного анализа (кИФА). Разработана и валидирована методика контроля аллергенной активности in vitro на основе кИФА. Проведены разработка и аттестация 15 первичных СОП ААА с присвоением им аллергенной активности в  EAA/мл по результатам тестирования методом кожных проб in vivo. Выполнен анализ экспериментальных данных с целью установления норм аллергенной активности для номенклатуры пыльцевых аллергенов, выпускаемых АО «НПО «Микроген». Разработаны и валидированы в соответствии с Государственной фармакопеей Российской Федерации физико-химические методы аттестации СОП ААА. Определены условия хроматографического разделения остаточных органических растворителей (ацетона, диэтилового эфира) и параметры пригодности хроматографической системы. Проведена аттестация вторичных СОП ААА методом кИФА по показателю аллергенной активности относительно первичных СОП, что позволило перейти к стандартизации препаратов аллергенов методом in vitro.

Выводы. Разработана методология  стандартизации препаратов  аллергенов  методом кИФА по степени ингибирования иммунологической реакции в сравнении со стандартным образцом. Обоснована целесообразность исключения  показателя  «Содержание  белкового азота» (в единицах белкового азота, PNU) и замены его на показатель «Аллергенная активность» (в ЕАА). Полученные СОП ААА впервые на предприятии были аттестованы в ЕАА. Разработана и валидирована аналитическая методика определения количественного содержания остаточных органических растворителей в препаратах аллергенов с помощью метода газожидкостной хроматографии.

1. Невская ЛВ, Лавренчик ЕИ, Жданова МЮ, Фадейкина ОВ, Капитанова ВК. Международный опыт стандартизации препаратов аллергенов. БИОпрепараты. Профилактика, диагностика, лечение. 2017;17(4):222–9. EDN: ZXGLKT

2. Цымбаревич ИВ, Ефимова ИС, Калинин СП, Зубков АВ, Мазурина СА, Михайлова НА, Зубкова НВ. Характеристика кандидата в стандартные образцы аллергена из пыльцы тимофеевки луговой по белковому профилю и специфическим аллергенным компонентам. БИОпрепараты. Профилактика, диагностика, лечение. 2018;18(2): 92–7. https://doi.org/10.30895/2221-996X-2018-18-2-92-97

3. Bastl K, Bastl M, Bergmann K-C, Berger M, Berger U. Translating the burden of pollen allergy into numbers using electronically generated symptom data from the patient’s hayfever diary in Austria and Germany: 10-year observational study. J Med Internet Res. 2020;22(2):e16767. https://doi.org/10.2196/16767

4. Kiguchi T, Yamamoto-Hanada K, Saito-Abe M, Sato M, Irahara M, Ogita H, et al. Pollen-food allergy syndrome and component sensitization in adolescents: A Japanese population-based study. PLoS One. 2021;16(4):e0249649. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0249649

5. Ta V, Scott DR, Chin WK, Wineinger NE, Kelso JM, White AA. Differential skin test reactivity to pollens in pollen food allergy syndrome versus allergic rhinitis. Allergy Asthma Proc. 2015;36(5):379–85. https://doi.org/10.2500/aap.2015.36.3862

6. Таубэ АА, Буянова ТА, Саканян ЕИ. Минимизация рисков применения лекарственных препаратов на основе пыльцы на стадии заготовки сырья. Фармация и фармакология. 2022;10(2):154–63. https: //doi.org/10.19163/2307-9266-2022-10-2-154-163

7. Yagami A, Ebisawa M. New findings, pathophysiology, and antigen analysis in pollen-food allergy syndrome. Curr Opin Allergy Clin Immunol. 2019;19(3):218–23. https://doi.org/10.1097/aci.0000000000000533

8. Петрова СЮ, Бержец ВМ, Петрова НС, Хрулева ВА, Емельянов ОЮ, Хлгатян СВ, Коренева ЕА. Перспективы развития лечебных форм аллергенов. От абстрактных проблем к конкретным решениям. Иммунопатология, аллергология, инфектология. 2018;(1):40–7. https://doi.org/10.14427/jipai.2018.1.40

9. Fortescue R, Kew KM, Tsun Leung MS. Sublingual immunotherapy for asthma. Cochrane Database Syst Rev. 2020;9(9):CD011293. https://doi.org/10.1002/14651858.cd011293.pub3

10. Asero R, Mistrello G, Amato S. Detection of pan-allergens in commercial pollen extracts for allergen immunotherapy. Ann Allergy Asthma Immunol. 2016;117(2):180–5. https://doi.org/10.1016/j.anai.2016.05.010

11. Poncet P, Sénéchal H, Charpin D. Update on pollen-food allergy syndrome. Rev Clin Immunol. 2020;16(6):561–78. https://doi.org/10.1080/1744666x.2020.1774366

12. Zimmer J, Bridgewater J, Ferreira F, van Ree R, Rabin RL, Vieths S. The history, present and future of allergen standardization in the United States and Europe. Front Immunol. 2021;12:725831. https://doi.org/10.3389/fimmu.2021.725831

13. Gjesing B, Jäger L, Marsh DG, Løwenstein H. The international collaborative study establishing the first international standard for timothy (Phleum pratense) grass pollen allergenic extract. J Allergy Clin Immunol. 1985;75(2):258–67. https://doi.org/10.1016/0091-6749(85)90055-7

14. Бубенчиков РА, Саканян ЕИ, Зубкова НВ, Добрынин ВП, Горяинов СВ, Хажжар Ф и др. Разработка и валидация методики количественного определения остаточных органических растворителей в препаратах аллергенов методом ГЖХ. Разработка и регистрация лекарственных средств. 2022;11(2):159–68. https://doi.org/10.33380/2305-2066-2022-11-2-159-168