К вопросу оценки вирусной безопасности индивидуальных единиц субстанции «Плазма человека для фракционирования» методом амплификации нуклеиновых кислот

Актуальность. Отсутствие гемотрансмиссивных вирусов в лекарственных препаратах, полученных из плазмы крови человека, должно быть обеспечено контролем исходного сырья и технологией производства.

Цель. Изучение критериев пригодности системы методики при оценке вирусной безопасности индивидуальных единиц субстанции «Плазма человека  для фракционирования» в отношении содержания нуклеиновых кислот гемотрансмиссивных вирусов с учетом требований Европейской фармакопеи.

Материалы и методы. Индивидуальные единицы субстанции «Плазма человека для фракционирования» (далее — плазма); международные стандартные образцы (МСО) РНК  вируса иммунодефицита человека, вирусов  гепатитов А  и  С  (ВГА  и  ВГС),  ДНК  вируса  гепатита В (ВГВ) и парвовируса B19; наборы реагентов для выявления нуклеиновых кислот указанных вирусов методом полимеразной цепной реакции (ПЦР).

Результаты. В исследованных образцах плазмы не выявлена РНК  ВГС;  ДНК  парвовируса В19 обнаружена в одном образце плазмы из восьми, концентрация не превышала 10⁴ МЕ/мл. Использованные наборы реагентов в трех испытаниях соответствующих МСО позволили выявить РНК ВГС в концентрации  10² МЕ/мл,  ДНК  парвовируса  В19  (генотип М1) — 10⁴ МЕ/мл. Результаты дополнительных испытаний двух образцов плазмы с учетом требований Европейской фармакопеи при определении РНК ВГС и ДНК парвовируса В19 показали, что новая серия набора реагентов выявляла 10² МЕ/мл МСО РНК ВГС только в одном из трех испытаний, что не соответствует заявленной чувствительности набора реагентов. В одном из двух образцов плазмы РНК ВГС не была обнаружена ни в одном испытании с добавлением МСО РНК ВГС до концентрации 10² и 10³ МЕ/мл, возможно, из-за ингибирующих свойств плазмы. В отношении ДНК парвовируса В19 чувствительность наборов реагентов соответствовала заявленной, ингибирующие свойства исследованных образцов плазмы не выявлены.

Выводы. При применении метода ПЦР для оценки вирусной безопасности плазмы, предназначенной для производства препаратов крови, целесообразно использование контрольных образцов, охарактеризованных в МЕ/мл. Для установления критериев пригодности системы методики с их применением необходима разработка соответствующих фармакопейных стандартных образцов.

1. Попцов АЛ, Парамонов ИВ, Фетищева НЮ. Верификация методики выявления и количественного определения ДНК парвовируса В19 методом ПЦР в плазме для фракционирования. Вестник Службы крови России. 2014;(1):48–53. EDN: SACMUR

2. Филатова ЕВ, Зубкова НВ, Новикова НА, Голицына ЛН, Кузнецов КВ. Определение маркеров парвовируса В19 в образцах крови доноров. Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2010;(5):67–70. EDN: VYZOAF

3. Филатова ЕВ, Зубкова НВ, Короткова ТВ, Гальговская СА, Анастасиев ВВ. Оценка изменения концентрации ДНК парвовируса В19 при модельном фракционировании плазмы крови доноров. Гематология и трансфузиология. 2011;56(3):10–4. EDN: NWGNUF

4. Зубкова НВ, Казьянин АВ, Николаева АМ, Лаптева ЛК, Силин ЕВ. Алгоритм входного контроля вирусной безопасности сырья для производства лечебных препаратов из плазмы крови доноров. Гематология и трансфузиология. 2012;57(1):9–13. EDN: PEVZSL

5. Зубкова НВ. Обеспечение инфекционной безопасности препаратов из плазмы крови доноров. Гематология и трансфузиология. 2014;59(2):44–9. EDN: SNTTVT

6. Парамонов ИВ, Попцов АЛ, Кудашева ЭЮ. Алгоритм исследования плазмы для фракционирования на наличие РНК вируса гепатита А. Трансфузиология. 2016;17(4):71–7. EDN: ZHKLUV

7. Останкова ЮВ, Хамитова ИВ, Лаврентьева ИН, Семенов АВ. Способ выявления в биологическом материале ДНК вируса парвовирус В19 на основе двухэтапной ПЦР. Патент Российской Федерации № 2753310; 2019. EDN: AOLCQJ

8. Zou W, Wang Z, Xiong M, Chen AY, Xu P, Ganaie SS, et al. Human parvovirus B19 utilizes cellular DNA replication machinery for viral DNA replication. J Virol. 2018;92(5):e01881-17. https://doi.org/10.1128/jvi.01881-17

9. Taconet L, Seifner A, Baylis SA, Chudy M, Kreβ J, Mathys E, et al. Detection of hepatitis C virus and parvovirus B19 in human plasma pools by nucleicacid amplification techniques — Trends in results of EDQM proficiency testing studies from 2004 to 2018. Biologicals. 2021;71:9–19. https://doi.org/10.1016/j.biologicals.2021.04.004

10. Toppinen M, Norja P, Aaltonen L-M, Wessberg S, Hedman L, Söderlund-Venermo M, Hedman K. A new quantitative PCR for human parvovirus B19 genotypes. J Virol Methods. 2015;218:40–5. https://doi.org/10.1016/j.jviromet.2015.03.006

11. Игнатова ЕН, Туполева ТА, Овчинникова ЕН, Романова ТЮ, Ярославцева НГ, Филатов ФП и др. Влияние современных подходов к лабораторному обследованию доноров крови и ее компонентов на инфицированность вирусом гепатита В у больных с заболеваниями системы крови. Терапевтический архив. 2017;89(11):27–34. EDN: ZWOSNR

12. Бердюгина ОВ. Выявляемость нуклеиновых кислот вирусов гепатитов В и С методом ПЦР в рутинной клинической практике. В кн.: Молекулярная диагностика. Сборник трудов. Т. 1. М.: Юлис; 2021. С. 15–6. EDN: EZEXKA

13. O’Brien SF, Yi QL, Fan W, Scalia V, Goldman M, Fearon MA. Residual risk of HIV, HCV and HBV in Canada. Transfus Apher Sci. 2017;56(3):389–91. https://doi.org/10.1016/j.transci.2017.03.010

14. Ha J, Park Y, Kim HS. Evaluation of clinical sensitivity and specificity of hepatitis B virus (HBV), hepatitis C virus, and human immunodeficiency Virus-1 by cobas MPX: Detection of occult HBV infection in an HBV-endemic area. J Clin Virol. 2017;96:60–3. https://doi.org/10.1016/j.jcv.2017.09.010